日本成熟少妇喷浆视频 I 被窝影院午夜无码国产 I 日韩国产丝袜人妻一二区 I 欧洲视频一区二区三区 I 中文www天堂 I 欧美日韩国产激情视频 I 极品美女一区二区三区图片 I 伊人久久大香线蕉综合影院首页 I 成人久久综合 I 亚洲人免费 I 最新精品国偷自产在线老年人 I 亚拍精品一区二区三区探花 I chinesemature沈阳 I av网站免费在线观看 I 天天插综合 I 国产免费高清69式视频在线观看 I 亚洲精品一区二区在线观看 I 99自拍偷拍视频 I 国产1区2区在线观看 I 真人插b免费视频播放 I 国产一区二区黑人97xxxx I 最新国产麻豆aⅴ精品无码 I 91日日干 I 欧美资源在线观看 I 国产91精品久久久久久 I 日韩精品内射视频免费观看 I 99久久99久久 I www.综合色 I 国产色综合一区 I 欧美精品1区二区

液氮超低溫保存技術(shù)在果樹種質(zhì)資源保存中的應(yīng)用

時(shí)間:2020-06-08 17:08來源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊:
目前,世界上的植物遺傳基礎(chǔ)趨向單一化,一些地方品種及珍貴稀有的作物資源也從地球上逐漸消失。因此世界各國對種質(zhì)資源的收集和保存都非常重視,近幾十年來,液氮超低溫保存技術(shù)發(fā)展迅速,為種質(zhì)資源的保存開辟了新的途徑。液氮罐

  1 液氮超低溫保存技術(shù)原理及優(yōu)點(diǎn)

  通常將-80℃以下的溫度稱為超低溫。超低溫冷凍保存一般以液態(tài)氮為冷源,使保存溫度維持在-196℃。生物材料在如此低溫下,新陳代謝活動(dòng)基本停止,處于"生機(jī)停頓"(Suspanded animation)狀態(tài)。這就有可能極大地延長儲(chǔ)存材料的壽命,而不產(chǎn)生遺傳變異,從而有效地、安全地長期保存那些珍貴稀有的種質(zhì)。 利用液態(tài)氮保存植物種質(zhì),液氮冷凍容器就是液氮罐。除了1~2個(gè)月補(bǔ)充一次液氮外,不需要機(jī)械空調(diào)設(shè)備及其它管理,節(jié)省了大量的人力和物力。并且可以保持被保存組織及細(xì)胞培養(yǎng)物的遺傳穩(wěn)定性。因此比其它保存方法有著很大的優(yōu)點(diǎn)。

  2 基本程序

  2.1 材料的準(zhǔn)備與選擇

  超低溫保存的材料一般選擇處在指數(shù)增長的細(xì)胞材料。如愈傷組織的超低溫保存一般選擇培養(yǎng)18~24d的培養(yǎng)物作為材料。

  2.2 預(yù)處理

  使保存材料達(dá)到*適合于超低溫保存的生理狀態(tài)。主要是提高分裂相細(xì)胞的比例的減少細(xì)胞內(nèi)自由水含量。

  2.3 放入冰浴

  將材料裝入試管或其他保存容器中,并隨既插入冰浴中。

  2.4 加入保護(hù)劑

  加入0℃預(yù)冷冰凍保護(hù)劑,在0℃冰浴中放團(tuán)置30~45min。

  2.5 降溫冰凍

  (1)直接投入液氮。

  (2)程序慢速0.05~5℃/min降溫到投入液氮。

  (3)慢速降溫到預(yù)凍溫度(-30℃),停留一段時(shí)間(1~3h)后投入液氮。

  (4)逐級(jí)降溫后投入液氮,如:0℃——-10℃(5min)——-15℃(5min)——-23℃(5min)——-30℃(5min)——-40℃(5min)——-196℃(液氮)。

  2.6 保存后的化凍

  一般在37℃~40℃溫水中快速化凍。

  2.7 活力鑒定

  通常采用TTC法,也稱氯化三苯四液唑還原法。如果是單細(xì)胞或原生質(zhì)體,可以采用活性熒光素染色法,顯示活細(xì)胞,統(tǒng)計(jì)存活率。

  2.8 再培養(yǎng)

  觀察組織細(xì)胞恢復(fù)生物的速度,存活率,植株的再生能力。液氮罐

  2.9 遺傳性狀分析

  植株形態(tài)特征,生長發(fā)育,染色體、同工酶譜及抗逆性等。

  3 影響超低溫保存效果的因素

  3.1 材料的特性

  包括植物的基因型,抗凍性,器官、組織和細(xì)胞怕年齡、生理狀態(tài)等。這些因素對眧低溫保存效果有很大的影響,從而要求在整個(gè)保存處理過程中采取相應(yīng)的,符合其特性的各種適宜的措施。比如材料如果是含量有液胞小、含水量小的細(xì)胞(如莖尖分生組織等),可用用快速降溫冰凍方法。含液胞大、含水量高的細(xì)胞的則一般需要采用慢速降溫法律等等。

  3.2 預(yù)處理

  是為了使保存材料達(dá)到超低溫保存所要求的生理特性:增加細(xì)胞分裂與分化的同步化。減少細(xì)胞慛自由水的含量。增強(qiáng)細(xì)胞的抗寒力。主要的方法有以下幾種。

  3.2.1 細(xì)胞、組織繼代培養(yǎng)中,細(xì)胞分裂分化同步化調(diào)控。L.A.Withers等指出,有絲分裂前或稍后的細(xì)胞抗凍能力強(qiáng),處于這個(gè)時(shí)期的細(xì)胞在超低溫保存后存活率高。

  3.2.2 預(yù)培養(yǎng):增加培養(yǎng)基中的糖濃度,提高滲透壓。或者在預(yù)處理培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)抗寒力的物質(zhì)或冰凍保存劑,如脫落酸、山梨醇、二甲亞砜等。

  3.2.3 低溫鍛煉:一些植物如康乃馨、蘋果等的莖尖在液氮保存前經(jīng)過低溫鍛煉可以提高存活率。

  另外,有些報(bào)道中采用上述幾種方法結(jié)合處理達(dá)到**效果。

  3.3 冰凍保護(hù)劑

  作為冰凍保存劑的物質(zhì)需要具備發(fā)下特性:(1)易溶于水。(2)在適當(dāng)?shù)臐舛认聦?xì)胞是無毒的。(3)化凍后容易從組織細(xì)胞中少清除。常用的冰凍保護(hù)劑有二甲基亞砜、甘油、糖的糖醇為物質(zhì)等。

  3.4 降溫冰凍方法

  材料經(jīng)冰凍保護(hù)劑在0℃預(yù)處理30~40min后,要立即降溫冰凍,*后到達(dá)液氮中保存,降溫方法是影響超低溫保存效果的關(guān)鍵因素之一,所以它在超低溫保存技術(shù)體系中一直是注意較多的一個(gè)方面。一般根據(jù)不肉中刺的保存對象有四種不同的降溫就去:快速冰凍法、慢速冰凍法、兩步冰凍法、逐級(jí)冰凍法。

  3.5 化凍方法

  大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明,植物的凍害常常是發(fā)生在冰凍和化凍兩個(gè)過程中,因此除了需要有一個(gè)合適的降溫冰凍程序外,還要有一個(gè)合適的化凍方法,以避免在化凍過程中產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)的次生結(jié)冰。并防止在化凍吸水過程中水的滲透沖擊對細(xì)胞膜體系的在破壞。一般采用快速化凍法。即將液氮保存后的材料在37-40℃的溫水浴中化凍。因數(shù)超低溫冰凍材料化凍時(shí),再次結(jié)冰的危險(xiǎn)區(qū)域是-50℃~10℃.從理論上講可以借助迅速的化凍速度通過此溫度區(qū),從而可以避免細(xì)胞內(nèi)的次生結(jié)冰。但是如果材料是木本科和冬芽,那么在超低溫保存后必須在0℃低溫下進(jìn)行慢速化凍才能達(dá)到良好效果,因?yàn)槎恳呀?jīng)經(jīng)過低溫鍛煉,細(xì)胞內(nèi)的水分已經(jīng)*在限度地流到細(xì)胞外結(jié)冰,快速化凍時(shí)會(huì)受到猛烈的滲透沖擊,從而會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜的破壞,因此需要慢速解凍

  4、在果樹質(zhì)資源保存中的應(yīng)用

  4.1 花粉

  *早在1922年,H.E.Knowlton就已經(jīng)在金魚草花粉方面取得了一害的成功。他把金魚草花粉冷凍到-180℃后,仍然獲得了一定程度的花粉的超低溫成功保存已有許多報(bào)道。已經(jīng)取得成功的有桃、李、木瓜、棗椰、鱷梨、胡桃等許多樹種。日本的Yatabe果樹試驗(yàn)站利用超低溫保存技術(shù)已經(jīng)保存了桃的60個(gè)栽培品種和品系的花粉,時(shí)間已達(dá)十年以上。

  4.2 種子

  種子在-18℃,含水量(5+1)%的情況下其新陳代謝仍然發(fā)生,導(dǎo)致生活力*終衰退。特別是執(zhí)拗型種子的壽命更短,難以保存。超低溫保存技術(shù)可以克服這些不利因素,使種子保存更為長久。目前果樹方面利用超低溫保存種子有檸檬、海棠等。

  4.3 枝條、芽及莖尖分生組織

  由于莖尖分生組織細(xì)胞分化程度小,倍性一致辭,遺傳上比較穩(wěn)定,且在離體條件下容易再生新植株,因此,莖尖的種質(zhì)保存意義重大。枝條、芽也是保存無性繁殖植物種質(zhì)的方便途徑。1978年日本學(xué)者就已報(bào)道了蘋果、梨、醋栗等果樹冬芽超低溫保存的成功。此后在蘋果、草莓等果樹莖尖保存中也取得了成功。液氮罐

  4.4 幼胚及胚狀體

  單倍體細(xì)胞在遺傳上是不穩(wěn)定的,超低溫保存將是保持單倍體穩(wěn)定性的有效途徑。據(jù)Y.P.S.Bajiaj報(bào)道,柑桔的珠心胚經(jīng)過液氮保存后存活率為24%~28%。

  4.5 組織及細(xì)胞

  愈傷組織及懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的超低溫保存也是果樹種質(zhì)資源保存的一個(gè)有途徑。在酸櫻桃、甘蔗、草莓等的愈傷組織及懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的超低溫保存方面取得成功。

  4.6 原生質(zhì)體

  原生質(zhì)體具有多種用途,特別是在開辟果樹育種方面有著廣闊的前景,它是進(jìn)行細(xì)胞雜交和基因工程的基礎(chǔ)材料。對原生質(zhì)體的超低溫保存有著更大的優(yōu)越性:與具有細(xì)胞壁的細(xì)胞相比,它降低了冰凍的危害,能得到更高的存活率。但是原生質(zhì)體的超低溫保存要求較高,果樹原生質(zhì)體的超低溫保存報(bào)道較少。馬峰旺等(1998)報(bào)道,杏的一些品種的懸浮培養(yǎng)物分離的原生質(zhì)體超低溫保存后成活率可達(dá)40%。

  超低溫保存技術(shù)在種質(zhì)資源保存方面已經(jīng)取得了很大的成就,相信隨著超低溫技術(shù)的發(fā)展,在這一方面的應(yīng)用會(huì)愈加成熟,這一技術(shù)也必將為保持地球生態(tài)多樣性作出更大的項(xiàng)獻(xiàn)。
本文鏈接地址:http://www.fuyunfloor.cn/1776.html
收縮
  • 電話咨詢

  • 010-80204245
  • 13718238054
  • 15901125602
  • 微信咨詢
官方微信
展開 收縮
  • 電話咨詢

  • 010-80204245
  • 13718238054
  • 15901125602
  • 微信咨詢
官方微信

主站蜘蛛池模板: 免费人成激情视频在线观看冫 | 国产熟妇勾子乱视频 | 国产偷国产偷亚洲清高孕妇 | 色伊人久久 | 亚洲有吗在线 | 日韩精品在线一区二区三区 | 欧美天堂在线 | 黑人巨大精品欧美一区免费视频 | 96亚洲精品久久久蜜桃 | 青青草原精品99久久精品66 | 欧美亚洲国产第一精品久久 | 亚洲韩欧美第25集完整版 | 国产精彩亚洲中文在线 | 亚洲国产精品一区二区九九 | 精品无码久久久久国产手机版 | av色噜噜 | 一区二区三区欧美日韩 | 中文字幕视频在线 | 欧美成人va免费看视频 | 久久成人成狠狠爱综合网 | 综合久久久 | 免费看黄在线网站 | 精品无码欧美黑人又粗又 | 亚洲午夜18毛片在线看 | 久久久亚洲裙底偷窥综合 | 青青视频在线免费观看 | 久久久免费观看视频 | 日韩精品免费一区二区 | 亚洲综合一二三 | 午夜一区二区亚洲福利 | 亚洲综合久久久 | 四虎午夜影院 | 日韩精品久久久久久久电影蜜臀 | а√天堂www在线а√天堂资源 | 国产果冻豆传媒麻婆 | av播播 | 爆乳女仆高潮在线观看 | 日本www在线视频 | 草草女人院 | 亚洲国产成人久久综合一区 | 久久久久国产精品嫩草影院 | 中文字幕av无码一区二区三区电影 | 少妇被粗大的猛进69视频 | 国产一卡二卡三卡四卡视频版 | 日韩乱码人妻无码中文字幕 | 国模蔻蔻私拍极品150p | 老熟妇乱子伦系列视频 | 亚洲国产精品无码第一区二区三区 | 亚洲国产精品999 | 情侣自拍80秒舌吻视频 | 成人无码精品免费视频在线观看 | 另类色综合 | 深夜做爰性大片108式 | 亚洲一区二区三区波多野结衣 | 亚洲一区二区三区 无码 | 妩媚尤物娇喘无力呻吟在线视频 | 亚洲人和日本人jzz视频 | 人人妻人人狠人人爽天天综合网 | 精品久久久久久久久久软件 | 主站蜘蛛池模板: 蛛词}| 高清国产一区二区三区在线 | 日日拍拍| 久久这里只精品国产免费9 一级片在线观看免费 | 好了av四色综合无码久久 | 69久久99精品久久久久婷婷 | 二区三区在线视频 | 少妇粉嫩小泬喷水视频 | 久久久e热视频 | 亚洲综合五月天 | 欧美激情一区二区三区高清视频 | 成人一区二区在线 | 欧美韩日一区二区 | 亚洲日本一区二区三区 | 亚洲精品一区二区三区不卡 | 四虎wwwaa884成人精品视频 | 久久一级片 | 91色多多 | 日本高清视频色欧www | 人妻激情文学 | 一区二区福利视频 | 无码高潮又爽又黄a片日本动漫 | 最新在线观看av | 国产成人8x人网站在线视频 | 午夜视频久久久 | 97精品国产97久久久久久春色 | 女人高爱潮aa级毛片视频免费 | 精品系列无码一区二区三区 | 久久综合给合久久97色 | 久久精品屋 | 少妇第一次交换又紧又爽 | 国产成人啪精品午夜网站a片免费 | 人妻被按摩到潮喷中文字幕 | 国产欧美色图 | 日韩动漫av | 国产麻豆成人传媒免费观看 | 国产制片厂爱豆传媒在线观看 | 97干干干| 在线精品视频一区二区 | 亚洲va韩国va欧美va精品 | 精品国产高清自在线一区二区 | 国产免费丝袜调教视频免费的 | 男男毛片 | 性爱一级视频 | 成人免费无码大片a毛片抽搐 | 欧美日韩国产一区二区三区 | 那个网站可以看毛片 | 日韩插啊免费视频在线观看 | 亚洲 欧美 影音先锋 | 欧美精品乱人伦久久久久久 | 亚洲依依成人亚洲社区 | 最近的中文字幕免费完整版 | 少妇性l交大片毛多 | 国产精品99久久久久久久vr | 亚洲精华国产精华精华 | 色www亚洲国产张柏芝 | 欧美www. | 亚洲欧洲日产国码无码网站 | 亚洲自偷自偷在线成人网站传媒 | 国产美女自卫慰黄网站 | 主站蜘蛛池模板: 蛛词}| 国产18在线 | 国产喷水吹潮视频www | 国产亚洲欧美日韩高清 | 天堂中文а√在线官网 | 偷欧洲亚洲另类图片av天堂 | 在线观看亚洲精品 | 熟女少妇内射日韩亚洲 | 综合色区国产亚洲另类 | 久久99精品热在线观看 | 91精选国产 | 越南性受xxx精品 | 曰韩人妻无码一区二区三区综合部 | 在线观看av影院 | 欧美视频亚洲图片 | а天堂中文地址在线 | 无码人妻h动漫 | 欧美潮喷少妇100 | 国产成人精品一区二区三区在线 | 乱人伦人妻中文字幕在线入口 | 亚洲色成人一区二区三区 | 99九九99九九九99九他书对 | 久久黄色片视频 | 强开小婷嫩苞又嫩又紧视频韩国 | 久久污 | 无码人妻一区二区三区免费看成人 | 中文av在线免费观看 | 成人aaa视频 | av爽妇网 | 日韩经典在线观看 | 久久亚洲国产五月综合网 | 国产尤物av一区二区三区 | 国产最新自拍视频 | 欧美精品一区二区三区在线 | 爱色视频 | 日本妇乱大交xxxxx | 加勒比一区二区三区 | 日本久久久久久 | 国产成人亚洲综合色就色 | 国产乱码精品一区二区三区不卡 | 黑人玩弄出轨人妻松雪 | 亚洲国产影院av久久久久 | 狠狠干天天 | 日韩成人自拍 | 国产在线播放网站 | 亚洲成人午夜影院 | 自偷自拍亚洲综合精品第一页 | 波多在线播放 | 大战熟女丰满人妻av | 啪啪高潮动态图 | 国产成人精品午夜视频' | 久久久久久动漫 | 伊人精品视频 | 无码亲近乱子伦免费视频在线观看 | 国产suv精品一区二区60 | 亚洲精品中国国产嫩草影院美女 | 国产成人免费97在线 | 亚洲国产精品女同互慰中文 | 日本亚洲欧洲免费无线码 | 成年无码动漫av片在线观看羞羞 | 主站蜘蛛池模板: 蛛词}| 最新中文字幕日本 | 九九热影院 | 精品国产乱码久久久人妻 | 国产在线视频一区二区三区98 | 国产看黄a大片爽爽影院 | 日产精品卡二卡三卡四卡乱码视频 | 国产乱人伦偷精品视频色欲 | 久久不见久久见www日本网 | 999久久久无码国产精品 | 国精品午夜福利视频不卡757 | 亚洲国产精品无码专区成人 | 多毛的亚洲人毛茸茸 | 久久精品人妻无码专区 | 一级大片免费 | 成人精品毛片va一区二区三区 | 男女猛烈xx00免费视频试看 | 91伦理视频 | 日本高潮视频 | 日本一二三区在线视频 | 最近中文字幕日本 | 日本涩涩网站 | 欧美a大片| 国产精品99久久免费黑人人妻 | 丁香伊人 | 国产蜜臀av在线一区尤物 | 日日摸日日添夜夜爽97 | 国产盗拍sap私密按摩视频 | 99久久婷婷国产综合精品草原 | 国产一区二区三区四区 | 天天影视色 | 中文字幕在线影视 | 国产乱淫视频 | 欧美a在线看 | 国内精品久久人妻无码妲己影院 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片 | 国产又黄又爽又色在线视频播放 | 欧美黄色高清 | 日本三级欧美三级人妇视频黑白配 | 亚洲国产精品久久久久久久久久久 | 综合久久久久久久久 | 新婚之夜疯狂做爰视频一区二区 | 免费无码久久成人影片 | 六十路熟妇乱子伦 | 亚洲3p激情在线观看 | 精品久久久99大香线蕉 | 在线色图 | 99日本精品永久免费久久 | 日韩欧美国产成人 | 日本在线a一区视频 | 精品人妻少妇一区二区三区在线 | 日韩少妇毛片 | 色免费在线 | 动漫精品视频一区二区三区 | 国产亚洲精品a在线看 | 欧美成人午夜在线视频 | 成人四虎| 日韩国产专区 | 国自产拍偷拍福利精品免费一 | 男人的天堂在线视频 | 主站蜘蛛池模板: 蛛词}| 亚洲动态色图 | 久久综合九色欧美综合狠狠 | 国产女人伦码一区二区三区不卡 | 人妻去按摩店被黑人按中出 | 99国产精品欧美久久久久的广告 | 亚洲自偷自偷在线制服 | 亚洲综合色网 | 成年视频在线观看 | 人体写真福利视频 | 国产精品爱久久久久久久电影 | 久久久97丨国产人妻熟女 | 国产精品爽爽久久久久久蜜臀 | 在线点播亚洲日韩国产欧美 | 国产精品一国产精品一k频道 | 污污网站18禁在线永久免费观看 | 风韵多水的老熟妇 | 歪歪爽蜜臀av久久精品人人 | 精品久久久久久中文字幕无码软件 | 欧美品无码一区二区三区在线蜜桃 | 插一插射一射视频 | 亚洲成人综合网站 | 天堂久久爱资源站www | 国产乱码二卡3卡四卡 | 久久精品视频观看 | 毛片大全在线播放 | 理论片高清免费理论片毛毛片 | 狠狠综合久久狠狠88亚洲 | 国产精品久久自在自线 | 黑人巨大精品欧美一区免费视频 | 久久久夜 | 久久久精品成人免费看片 | 99视屏| 人妻少妇无码精品专区 | 国产乱码精品一区二区蜜臀 | 国产精品美女www爽爽爽动态图 | chien国产乱露脸对白 | 激情五月中文字幕 | 国产一级在线免费观看 | 男人舔女人b视频 | 九九re热 | 韩日av网站| 懂色av一区二区夜夜嗨 | 4虎tv在线永久观看 婷婷色九月 | 国产精品无码素人福利 | 豆国产93在线 | 亚洲 | 欧美性猛交xxxx三人 | 天堂v视频 | 日韩中文字幕亚洲 | 国产麻豆精品福利在线 | 久久66热人妻偷产国产 | 超碰成人在线免费观看 | 欧美成人片在线观看 | 国产wwwav| 久久精品国产99国产精品澳门 | 久久九色综合九色99伊人 | 白嫩日本少妇做爰 | 扒开双腿吃奶呻吟做受视频 | 乳色吐息ova | 成人av综合网 |